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有效识别ALK蛋白表达 实现肺癌个体化治疗

      肺癌是全球排名第一位的肿瘤杀手。肺癌通常分为非小细胞肺癌(Non-small-cell carcinoma,NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。其中NSCLC占了肺癌的85%。

     随着肿瘤分子生物学的进展,临床上对NSCLC的认识正不断深入。研究表明,50% NSCLC的发生是由于一系列的驱动基因,找到驱动基因,再进行针对性用药,NSCLC治疗就能事半功倍。研究人员发现,胰岛素受体家族的成员——间变性淋巴瘤激酶(ALK)是NSCLC的关键启动癌基因。由于ALK阳性NSCLC具有明确的分子靶点、靶点检测技术以及上市的靶向药物,通过准确诊断ALK基因重排,ALK阳性患者可从酪氨酸激酶抑制剂(克唑替尼)治疗中获益,明显提高临床疗效。

       在日前举行的第七届中国病理医师年会期间,罗氏诊断举办了"ALK在NSCLC中的诊断与经验分享"卫星会,全国知名病理专家就ALK检测方法、最新标准化的ALK免疫组化检测判读指南等内容进行了探讨。

多种方法适用ALK融合基因检测

      根据今年6月由中国临床肿瘤学会肿瘤生物标志物专家委员会出台的《中国间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性非小细胞肺癌诊断专家共识(2013版)》(简称《共识》),荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)、基于PCR扩增基础上的技术和免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)均可作为针对ALK融合基因检测常用的方法,实验室可以根据组织标本类型选择合适的检测技术。

      由于大部分克唑替尼治疗ALK阳性NSCLC的临床试验均是基于FISH的诊断,因此,FISH检测目前仍是确定ALK融合基因的参考标准方法。但是,由于FISH检测对于操作和判读技术的要求很高,晚期NSCLC患者通常只能提供2毫米左右的小活检组织,因此很难保证每个视野存在50个以上的癌细胞供结果判读,暗视野下无法获得完整的组织形态学结构,而且FISH检测结果要求≥15%的判断界值(cut off)也存在商榷之处。研究结果显示少数ALK FISH检测阴性、IHC检测阳性的患者也能从靶向药物中获益。同时,目前FISH检测的成本昂贵,且不能明确ALK融合基因的具体融合变体。因此,在现阶段,FISH检测尚无法适用于中国ALK阳性NSCLC患者的大规模筛查和诊断。

     基于PCR扩增基础上的RT-PCR法检测ALK融合基因的特点在于快速、简便易行,能同时明确ALK基因已知的融合变体的类型。但是,该方法对于RNA提取的质量要求较高,国内部分实验室未具备严格的质量控制条件。此外,无法检测未知的融合型是其最大的不足之处,限制了其在ALK诊断中的应用。

    早期的ALK融合蛋白的IHC抗体敏感性较低,因此不适宜用于ALK融合蛋白的检测。随着技术的改进, 罗氏诊断VENTANA  ALK  IHC检测特异性高的,创新的扩增技术提高了检测灵敏度,同时采用全自动化操作,使检验流程和结果判读都得以标准化,可实现与FISH结果高度一致性,结果判读的可重复性为99.7%,为ALK检测的临床广泛应用带来了巨大的突破。

诊断应遵循科学原则与流程

       鉴于ALK基因重排或融合的分子诊断各种方法均有优缺点,且我国适用于ALK变异检测的肺癌患者人数众多,《共识》中提出一套行之有效的分子诊断流程:对于适合检测的肿瘤标本可直接选择Ventana IHC或FISH或RT-PCT方法进行分子检测诊断;对于EGFR阴性或基因状态未知,或EGFR基因突变患者在且使用EGFR-TKI治疗后出现原发或继发耐药的患者,由于存在EFGR基因突变和ALK基因变异双阳性的可能,因此也建议行ALK融合基因的检测。《共识》并认为IHC具有方便、易行、价格低的优势,适合于ALK阳性NSCLC的筛查。FISH和RT-PCR由于结果判读客观,且qRT-PCR已获CFDA批准用于临床检测,适合于最终的确诊。

    《共识》专家组推荐ALK基因状态检测的总体原则:应综合肺癌获取的各类生物材料的特征、分子检测方法的特点、实验室自身条件,进行多学科大协作,合理采取有效检测方法和流程,以保证ALK阳性肺癌的检出率和准确率。

首款全自动IHC检测获认可

     来自复旦大学附属肿瘤医院的免疫组化病例证实,VENTANA ALK IHC检测具有独特优势,如判读标准简单;敏感性高,均为强阳性颗粒,不用判断强度和百分比;全自动检测有效避免操作流程中的误差,可重复性好;可检测FFPE的细胞学样本、细针穿刺、支气管活检以及大体样品, 没有最低细胞数要求。最重要的是,价格便宜,可同时用于ALK的筛选和诊断。

     VENTANA ALK IHC检测是唯一获得欧盟认证的用于识别适合克唑替尼治疗的患者的体外诊断IHC检测,已在全球超过53个国家销售。日前,该检测获得了国家食品药品监督管理总局批准上市。该项批准基于一项囊括了北京肿瘤医院、中国医学科学院肿瘤医院、复旦大学附属肿瘤医院的1100个中国患者的回顾性研究,证明了VENTANA ALK IHC检测与雅培Vysis ALK Break Apart FISH 探针试剂盒的一致性达99.23%。(源自:健康报)

 

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    有效识别ALK蛋白表达 实现肺癌个体化治疗

          肺癌是全球排名第一位的肿瘤杀手。肺癌通常分为非小细胞肺癌(Non-small-cell carcinoma,NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。其中NSCLC占了肺癌的85%。

         随着肿瘤分子生物学的进展,临床上对NSCLC的认识正不断深入。研究表明,50% NSCLC的发生是由于一系列的驱动基因,找到驱动基因,再进行针对性用药,NSCLC治疗就能事半功倍。研究人员发现,胰岛素受体家族的成员——间变性淋巴瘤激酶(ALK)是NSCLC的关键启动癌基因。由于ALK阳性NSCLC具有明确的分子靶点、靶点检测技术以及上市的靶向药物,通过准确诊断ALK基因重排,ALK阳性患者可从酪氨酸激酶抑制剂(克唑替尼)治疗中获益,明显提高临床疗效。

           在日前举行的第七届中国病理医师年会期间,罗氏诊断举办了"ALK在NSCLC中的诊断与经验分享"卫星会,全国知名病理专家就ALK检测方法、最新标准化的ALK免疫组化检测判读指南等内容进行了探讨。

    多种方法适用ALK融合基因检测

          根据今年6月由中国临床肿瘤学会肿瘤生物标志物专家委员会出台的《中国间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性非小细胞肺癌诊断专家共识(2013版)》(简称《共识》),荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)、基于PCR扩增基础上的技术和免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)均可作为针对ALK融合基因检测常用的方法,实验室可以根据组织标本类型选择合适的检测技术。

          由于大部分克唑替尼治疗ALK阳性NSCLC的临床试验均是基于FISH的诊断,因此,FISH检测目前仍是确定ALK融合基因的参考标准方法。但是,由于FISH检测对于操作和判读技术的要求很高,晚期NSCLC患者通常只能提供2毫米左右的小活检组织,因此很难保证每个视野存在50个以上的癌细胞供结果判读,暗视野下无法获得完整的组织形态学结构,而且FISH检测结果要求≥15%的判断界值(cut off)也存在商榷之处。研究结果显示少数ALK FISH检测阴性、IHC检测阳性的患者也能从靶向药物中获益。同时,目前FISH检测的成本昂贵,且不能明确ALK融合基因的具体融合变体。因此,在现阶段,FISH检测尚无法适用于中国ALK阳性NSCLC患者的大规模筛查和诊断。

         基于PCR扩增基础上的RT-PCR法检测ALK融合基因的特点在于快速、简便易行,能同时明确ALK基因已知的融合变体的类型。但是,该方法对于RNA提取的质量要求较高,国内部分实验室未具备严格的质量控制条件。此外,无法检测未知的融合型是其最大的不足之处,限制了其在ALK诊断中的应用。

        早期的ALK融合蛋白的IHC抗体敏感性较低,因此不适宜用于ALK融合蛋白的检测。随着技术的改进, 罗氏诊断VENTANA  ALK  IHC检测特异性高的,创新的扩增技术提高了检测灵敏度,同时采用全自动化操作,使检验流程和结果判读都得以标准化,可实现与FISH结果高度一致性,结果判读的可重复性为99.7%,为ALK检测的临床广泛应用带来了巨大的突破。

    诊断应遵循科学原则与流程

           鉴于ALK基因重排或融合的分子诊断各种方法均有优缺点,且我国适用于ALK变异检测的肺癌患者人数众多,《共识》中提出一套行之有效的分子诊断流程:对于适合检测的肿瘤标本可直接选择Ventana IHC或FISH或RT-PCT方法进行分子检测诊断;对于EGFR阴性或基因状态未知,或EGFR基因突变患者在且使用EGFR-TKI治疗后出现原发或继发耐药的患者,由于存在EFGR基因突变和ALK基因变异双阳性的可能,因此也建议行ALK融合基因的检测。《共识》并认为IHC具有方便、易行、价格低的优势,适合于ALK阳性NSCLC的筛查。FISH和RT-PCR由于结果判读客观,且qRT-PCR已获CFDA批准用于临床检测,适合于最终的确诊。

        《共识》专家组推荐ALK基因状态检测的总体原则:应综合肺癌获取的各类生物材料的特征、分子检测方法的特点、实验室自身条件,进行多学科大协作,合理采取有效检测方法和流程,以保证ALK阳性肺癌的检出率和准确率。

    首款全自动IHC检测获认可

         来自复旦大学附属肿瘤医院的免疫组化病例证实,VENTANA ALK IHC检测具有独特优势,如判读标准简单;敏感性高,均为强阳性颗粒,不用判断强度和百分比;全自动检测有效避免操作流程中的误差,可重复性好;可检测FFPE的细胞学样本、细针穿刺、支气管活检以及大体样品, 没有最低细胞数要求。最重要的是,价格便宜,可同时用于ALK的筛选和诊断。

         VENTANA ALK IHC检测是唯一获得欧盟认证的用于识别适合克唑替尼治疗的患者的体外诊断IHC检测,已在全球超过53个国家销售。日前,该检测获得了国家食品药品监督管理总局批准上市。该项批准基于一项囊括了北京肿瘤医院、中国医学科学院肿瘤医院、复旦大学附属肿瘤医院的1100个中国患者的回顾性研究,证明了VENTANA ALK IHC检测与雅培Vysis ALK Break Apart FISH 探针试剂盒的一致性达99.23%。(源自:健康报)