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检测肺炎致病菌的快速分子测定

日前成功开发出来一种快速实时聚合酶链反应(qPCR),这种比现有办法快5倍的测定可直接利用呼吸道样本检测两种引起肺炎的微生物,虽然所检测的样本含有有限的几种目标微生物,例如肺炎支原体和肺炎衣原体,但还是能够保持相当的检测率。

美国疾病控制与预防中心呼吸道疾病分部(GDC;Atlanta,GA,USA)的科学家开发并评估了每种病原体的单纯测定,同时检测测肺炎支原体、肺炎衣原体和人类DNA的多重检测。鼻咽和/或口咽临床样本是由美国疾病控制与预防中心在2007年至2009年美国国内肺炎大爆发期间收集的。

这项研究使用了一些引物和探针,它们是以前为特异性检测肺炎支原体的ATP酶Mp3、肺炎衣原体的精氨酸抑制因子(argR)和人类核酸(RNase P)而设计和优化的。对多重反应来说,使用了PerfeCTa Multiplex qPCR SuperMix,单纯反应的反应混合物则含有PerfeCTa qPCR FastMix,这两者都是Quanta生物科学公司(Gaithersburg,MD,USA)的产品。在MagNA Pure Compact仪器(Roche Applied Science,Indianapolis,IN,USA)上用一种核酸分离试剂盒I从通用转移培养基(UTM)中提取总核酸(TNA)。

科学家们发现,用快速单纯测定或多重测定得到的结果是90%以上的一致性。随后他们又用UTM直接用临床样本不经核酸提取评估了快速实时PCR测定的性能。在标准实时PCR认定为阳性的样本中,单纯测定结果为肺炎支原体阳性和肺炎衣原体阳性的UTM样本比例分别在90%和59%。如果用快速多重测定检验,这两个百分比降至69%(肺炎支原体)和52%(肺炎衣原体)。

该研究的论文发表于2012年4月25日的《诊断微生物学与传染病》(Diagnostic Microbiology and Infectious Disease)杂志。作者总结说,当执行没有单独的提取步骤的快速实时PCR时,虽然观察到灵敏度有一些损失,但这一方法仍不失为基础医疗场合鉴定肺炎支原体和肺炎衣原体感染的宝贵工具,否则将注意不到或误诊。床旁检验将有可能改进病人的治疗,减少抗生素的不当使用,并能在即使结果至关重要的情况下快速检测病原体。

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    检测肺炎致病菌的快速分子测定

    日前成功开发出来一种快速实时聚合酶链反应(qPCR),这种比现有办法快5倍的测定可直接利用呼吸道样本检测两种引起肺炎的微生物,虽然所检测的样本含有有限的几种目标微生物,例如肺炎支原体和肺炎衣原体,但还是能够保持相当的检测率。

    美国疾病控制与预防中心呼吸道疾病分部(GDC;Atlanta,GA,USA)的科学家开发并评估了每种病原体的单纯测定,同时检测测肺炎支原体、肺炎衣原体和人类DNA的多重检测。鼻咽和/或口咽临床样本是由美国疾病控制与预防中心在2007年至2009年美国国内肺炎大爆发期间收集的。

    这项研究使用了一些引物和探针,它们是以前为特异性检测肺炎支原体的ATP酶Mp3、肺炎衣原体的精氨酸抑制因子(argR)和人类核酸(RNase P)而设计和优化的。对多重反应来说,使用了PerfeCTa Multiplex qPCR SuperMix,单纯反应的反应混合物则含有PerfeCTa qPCR FastMix,这两者都是Quanta生物科学公司(Gaithersburg,MD,USA)的产品。在MagNA Pure Compact仪器(Roche Applied Science,Indianapolis,IN,USA)上用一种核酸分离试剂盒I从通用转移培养基(UTM)中提取总核酸(TNA)。

    科学家们发现,用快速单纯测定或多重测定得到的结果是90%以上的一致性。随后他们又用UTM直接用临床样本不经核酸提取评估了快速实时PCR测定的性能。在标准实时PCR认定为阳性的样本中,单纯测定结果为肺炎支原体阳性和肺炎衣原体阳性的UTM样本比例分别在90%和59%。如果用快速多重测定检验,这两个百分比降至69%(肺炎支原体)和52%(肺炎衣原体)。

    该研究的论文发表于2012年4月25日的《诊断微生物学与传染病》(Diagnostic Microbiology and Infectious Disease)杂志。作者总结说,当执行没有单独的提取步骤的快速实时PCR时,虽然观察到灵敏度有一些损失,但这一方法仍不失为基础医疗场合鉴定肺炎支原体和肺炎衣原体感染的宝贵工具,否则将注意不到或误诊。床旁检验将有可能改进病人的治疗,减少抗生素的不当使用,并能在即使结果至关重要的情况下快速检测病原体。