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利什曼病的新型非扩增检测方法

      利什曼病的诊断需要广泛应用分子生物学技术来鉴定利什曼原虫,比较复杂,专业人士一直在寻找替代方法。其中,最新的是用纳米粒子检测特定的生物分子。

      希腊雅典大学的实验科学家培养了来自人和动物的不同种类利什曼原虫的15份分离物。从基因上与利什曼原虫相关的病原体以及一些细菌中选了40种阴性对照。

     他们用德国迪伦Macherey Nagel公司的Nucleospin组织试剂盒从全部样本中分离DNA。将美国犹他州盐湖城Nanopartz公司的金纳米粒子(AuNP)与四支寡核苷酸探针结合,靶向利什曼原虫的动质体微环DNA。目测试管或用瑞士门内多夫市帝肯公司的Infinite M200进行分光光度测量,记录结果。如果不存在互补DNA,AuNP探针则在酸环境下沉淀,使颜色从红变紫,肉眼就能看到。如果存在目标DNA,溶液仍保持红色。

      如果10微升样本内的利什曼原虫DNA不少于115纳克,该测定能产生一致的阳性结果,仅需目测试管就可检测到。因此该方法的最小检测限规定为每微升样本11.5纳克目标DNA。可重复性和可再现性为100%,参照经典的聚合酶链反应(PCR)方法的相对灵敏度与特异性分别为92%和100%。该方法将AuNP与四支单链寡核苷酸探针结合,为检测利什曼原虫DNA提供了容易、快速和便宜的方式。这种方法被视为资源贫乏地区的绝佳诊断解决方案,特别适合用于地方性动物病流行地区的筛查。

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    利什曼病的新型非扩增检测方法

          利什曼病的诊断需要广泛应用分子生物学技术来鉴定利什曼原虫,比较复杂,专业人士一直在寻找替代方法。其中,最新的是用纳米粒子检测特定的生物分子。

          希腊雅典大学的实验科学家培养了来自人和动物的不同种类利什曼原虫的15份分离物。从基因上与利什曼原虫相关的病原体以及一些细菌中选了40种阴性对照。

         他们用德国迪伦Macherey Nagel公司的Nucleospin组织试剂盒从全部样本中分离DNA。将美国犹他州盐湖城Nanopartz公司的金纳米粒子(AuNP)与四支寡核苷酸探针结合,靶向利什曼原虫的动质体微环DNA。目测试管或用瑞士门内多夫市帝肯公司的Infinite M200进行分光光度测量,记录结果。如果不存在互补DNA,AuNP探针则在酸环境下沉淀,使颜色从红变紫,肉眼就能看到。如果存在目标DNA,溶液仍保持红色。

          如果10微升样本内的利什曼原虫DNA不少于115纳克,该测定能产生一致的阳性结果,仅需目测试管就可检测到。因此该方法的最小检测限规定为每微升样本11.5纳克目标DNA。可重复性和可再现性为100%,参照经典的聚合酶链反应(PCR)方法的相对灵敏度与特异性分别为92%和100%。该方法将AuNP与四支单链寡核苷酸探针结合,为检测利什曼原虫DNA提供了容易、快速和便宜的方式。这种方法被视为资源贫乏地区的绝佳诊断解决方案,特别适合用于地方性动物病流行地区的筛查。