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诊断恶性疟疾的新方法——LAMP检验

当代,对于疟疾的诊断主要使用核苷酸扩增法,然而,核苷酸扩增法对于实验仪器的要求很高,需要的仪器复杂而昂贵,除了少数实力雄厚的实验室外,普通的实验室很难具备这样的水平。鉴于这一问题,科学家们近期研发出一种新型环介导恒温扩增法(LAMP),无需昂贵仪器就能对疟疾进行分子诊断,为分子技术提供了一套新平台。

孟加拉国达卡市国际腹泻病研究中心的科学家们与北美的同行们合作收集血样,包括106份显微镜检阳性的恶性疟原虫感染样本和105份显微镜检阴性样本。被取样者均有发热等疑似疟疾的症状。这些样本会由经验丰富的显微镜学家对厚涂片和薄涂片进行常规显微镜检。

美国纽约的生命技术公司(Grand Island)的英杰SYBR Green I超级混合物UDG提取DNA并执行实时聚合酶链反应(RT-PCR)。新设计的一组引物靶向18S核糖体核糖核酸(rRNA)基因,可检测全血样本中的恶性疟原虫。日本东京荣研化学株式会社的LAMP采用了这组新引物,这项研究通过比较以前描述的LAMP引物组评估了荣研化学株式会社的LAMP。用显微镜检测和实时PCR作为检测恶性疟原虫的参照方法。在LAMP反应中预先加入羟基萘酚蓝(HNB)引起明显的变色,因而改进了目测检测系统。

实验发现新型LAMP测定相较显微镜检的灵敏度为99.1%,相较实时PCR的灵敏度为98.1%,相对于显微镜检和实时PCR的特异性分别为99%和100%。改进的LAMP方法能在35分钟内检测至少5只疟原虫/微升感染血,而这项研究所测试的另一种LAMP方法扩增60分钟后最少能检测100只疟原虫/微升人血。

这项研究的发明者说,新的LAMP法诊断恶性疟疾的灵敏度和特异性都很高。这一方法能作为PCR的替代性分子诊断工具,也许还能成为诊断疟疾的标准方法,得到更广泛的应用。再者,这一方法非常有望成为保健检查和流行病检查中疟疾的临床诊断和治疗监控的实用型工具。

该研究成果最先于2014年3月5日发表在《Acta Tropica》杂志上。

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    诊断恶性疟疾的新方法——LAMP检验

    当代,对于疟疾的诊断主要使用核苷酸扩增法,然而,核苷酸扩增法对于实验仪器的要求很高,需要的仪器复杂而昂贵,除了少数实力雄厚的实验室外,普通的实验室很难具备这样的水平。鉴于这一问题,科学家们近期研发出一种新型环介导恒温扩增法(LAMP),无需昂贵仪器就能对疟疾进行分子诊断,为分子技术提供了一套新平台。

    孟加拉国达卡市国际腹泻病研究中心的科学家们与北美的同行们合作收集血样,包括106份显微镜检阳性的恶性疟原虫感染样本和105份显微镜检阴性样本。被取样者均有发热等疑似疟疾的症状。这些样本会由经验丰富的显微镜学家对厚涂片和薄涂片进行常规显微镜检。

    美国纽约的生命技术公司(Grand Island)的英杰SYBR Green I超级混合物UDG提取DNA并执行实时聚合酶链反应(RT-PCR)。新设计的一组引物靶向18S核糖体核糖核酸(rRNA)基因,可检测全血样本中的恶性疟原虫。日本东京荣研化学株式会社的LAMP采用了这组新引物,这项研究通过比较以前描述的LAMP引物组评估了荣研化学株式会社的LAMP。用显微镜检测和实时PCR作为检测恶性疟原虫的参照方法。在LAMP反应中预先加入羟基萘酚蓝(HNB)引起明显的变色,因而改进了目测检测系统。

    实验发现新型LAMP测定相较显微镜检的灵敏度为99.1%,相较实时PCR的灵敏度为98.1%,相对于显微镜检和实时PCR的特异性分别为99%和100%。改进的LAMP方法能在35分钟内检测至少5只疟原虫/微升感染血,而这项研究所测试的另一种LAMP方法扩增60分钟后最少能检测100只疟原虫/微升人血。

    这项研究的发明者说,新的LAMP法诊断恶性疟疾的灵敏度和特异性都很高。这一方法能作为PCR的替代性分子诊断工具,也许还能成为诊断疟疾的标准方法,得到更广泛的应用。再者,这一方法非常有望成为保健检查和流行病检查中疟疾的临床诊断和治疗监控的实用型工具。

    该研究成果最先于2014年3月5日发表在《Acta Tropica》杂志上。