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【CAIVD蓝皮书】血源安全检测(二)

第二节          血源安全检测项目及技术


血站血液采集作为社会血液供给的最主要来源,对于血液安全健康具有不可推卸的责任,所以确保血源健康安全是血站采供血机构重要任务,血源安全检测是保证血源健康安全重要环节之一。


一、        检测项目

大力开展无偿献血,对献血者必须进行谷丙转氨酶(ALT)、HBsAg、抗HCV检测。核酸血液筛查可大大提高血液安全性,特别是提高对我国较为复杂的HBV 低滴度感染标本的检出能力。(内容源自:核酸血筛在献血者常规筛查中的应用研究*曾劲峰1 许晓绚1 李活1 叶贤林1 陈华2△ 曹玉峰2( 1. 深圳市血液中心,广东深圳518035; 2. 上海科华生物技术有限公司)


依据2015板血站技术操作规程规定,血站采供血机构输血相关传染病的检测项目有:

1. 人类免疫缺陷病毒(HIV)感染标志物包括①人类免疫缺陷病毒核酸;②人类免疫缺陷病毒1型抗体(抗HIV-1)和人类免疫缺陷病毒2型抗体(抗HIV-2),或者抗HIV-1、抗HIV-2和p24抗原(HIV Ag/Ab);

2.乙型肝炎病毒(HBV)感染标志物包括:①乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA);②乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg);

3.丙型肝炎病毒(HCV)感染标志物包括:①丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA);②丙型肝炎病毒抗体(抗HCV),或者HCV抗原和抗体(HCV Ag/Ab);

4.梅毒螺旋体感染标志物:梅毒螺旋体特异性抗体(抗TP);

5. 丙氨酸氨基转移酶(ALT);

6.国家和省级卫生计生行政部门规定的地方性、时限性输血相关传染病标志物(如:HTLV等)。


在血液制品行业,因血液和血液制品在急救治疗和防病中的重要作用,确保液和原料血浆的安全,最大限度地降低经血传播疾病的危险。涉及相关检测项目除了上述的常规项目外,还涉及HCV、HDV、HTLV、CMV、EBV、B19 (Humanparvovirus)等


二、        检测方法及检测策略

依据2015板血站技术操作规程规定,检测方法包括:

1.核酸扩增检测技术包括转录介导的核酸扩增检测技术(TMA)、实时荧光聚合酶链反应(PCR);

2.血清学检测技术,包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光免疫分析试验(CLIA);

3. 速率法(湿化学法)。所以从事血源检测试剂生产的试剂厂家与血源安全检测息息相关。

检测策略

(1)实施核酸检测试剂批签发之前,HIV、HBV和HCV感染标志物应采用2遍血清学检测和1遍核酸检测,血清学检测应采用2个不同生产厂家的试剂;实施核酸检测试剂批签发之后,HIV、HBV和HCV感染标志物应采用核酸和血清学检测2种方法各进行1次检测。对于酶免检测阳性的标本可不再进行核酸检测,直接视为该项目检测结果不合格。

(2)梅毒螺旋体感染标志物采用2个不同生产厂家的血清学检测试剂进

行检测。

(3) ALT采用速率法(湿化学法)进行1次检测。其中血源筛查中核酸扩增检测技术对于隐匿性乙肝、免疫沉默。缩短了乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒检测的窗口期。

献血时,会遇到处于“窗口期”的献血者。“窗口期”是指部分献血者已经感染了HBV或HCV,在一段时间内抗HBV或抗HCV尚未产生。目前检测献血者常规检测不能检出。应用核酸技术进行检测科缩短“窗口期”,但并不能消除“窗口期”。筛选献血者的血清学检测方法不敏感。


三、        核酸检测的优势

控制输血相关传染病的传播已成为全社会关注的焦点,虽然现行的国家法定HBsAg 及HCV、HIV抗体的血清学ELISA 筛查检测大大降低了输血传染病毒风险,但由于我国是肝炎的高发区,HBsAg携带率为9. 09%,HBV 流行率高达60% 以上,抗-HCV 阳性也在3. 2%[1],艾滋病亦处于快速发展趋势,目前的ELISA 检测试剂灵敏度难以杜绝输血风险,报道的HCV RNA 阳性与LISA 阴性比率为0. 01% ~ 0. 19%,HBV DNA 阳性与ELISA 阴性比率0. 4% ~ 0. 92%,大大高于国外献血者检出率[2,3],输血血源质量存在极大隐患,主要原因在于病毒感染献血者的“窗口期”漏检现象。(内容源自:核酸血筛在献血者常规筛查中的应用研究*曾劲峰1 许晓绚1 李活1 叶贤林1 陈华2△ 曹玉峰2( 1. 深圳市血液中心,广东深圳518035; 2. 上海科华生物技术有限公司)

 

近年来,随着以核酸扩增检测技术(NAT)为代表的分子生物学技术在血液筛查方面的应用, 输血及血液制品安全性有了很大的提高, 从理论上该技术能显著地缩短病原体检出的“窗口期”, NAT检测HBV、HCV、HIV病毒的窗口期较抗体检测分别提前9天、25天和14天[2]。这一技术将在我国的血液中心、血库和血液制品生产企业逐步得到广泛的应用和推广

 (兰州生物制品研究所, 兰州 730046) 核酸扩增检测技术用于血液和原料血浆筛查的进展 周海云, 杨庆梅综述;张云涛审校

 

第三节         血源安全检测领域学术、技术和产品的国内外发展状况

 

1、            谷丙转氨酶(ALT)检测技术方法学进展

谷丙转氨酶(ALT)主要存在肝细胞中。ALT在健康人群中,血清含量很低,当肝脏发生病变损害时,肝细胞质内的ALT因肝细胞膜的通透性增强而释放到血液中,导致血液中的ALT含量升高。ALT的升高大致可分为病理和非病理因素。病理因素包括肝脏本身疾病;其他含有ALT的脏器组织如心、肾、脑等,如果出现病变,也可在血液中出现ALT异常;如果ALT排除的管道出现梗阻如胆管、胆囊和胰腺,均可使ALT升高。生理因素包括重度脂肪血、、感冒、饮酒、药物、剧烈运动、睡眠不足、体质量超标等引起的非特异性升高。另外也会因性别、年龄、职业、季节等有关。另外,血样的运输、保存、温度等多种条件也可引起ALT的升高,如夏季温度相对较高,采集后的血液容易导致离体的血细胞糖酵解代谢增强,进而引起酮体过多,造成ALT升高。


谷丙转氨酶(ALT)检测的临床意义随着检测技术的发展也产生了一些变化。国内外许多文献介绍ALT异常与抗-HCV和HBV表面抗原的阳性有一定相关性,ALT的异常升高与输血引起的肝炎有平行关系。在对HBV和HCV特异性检测技术不成熟的情况下,ALT对预防HBV和HCV输血有一定的预防作用。对于HBV检测而言,随着酶联免疫吸附技术已趋于成熟;HBV-DNA核酸检测技术应用;对于HCV检测而言,随着第二三代抗-HCV的特异性酶联免疫吸附检测方法的提高,将窗口期缩短至6周;以及HCV-DNA核酸检测技术应用。在某种程度上,ALT血筛在核酸检测未开展地区仍然起到一定的避免漏检作用。


谷丙转氨酶(ALT)检测技术方法学有四种即层析法、比色法、速率法(又称连续检测法或动力学法)、荧光法。比色法影响因素较多,敏感性和特异性较差,不需要特殊仪器检测,检测试剂相对便宜;速率法与比色法相比,检测结果相对准确,且需要生化分析仪,对试剂的要求也相对较高。自从中国1997年颁布的《输血技术操作规程》中新增速率法之后,目前国内多数血液机构都使用大型生化分析仪,采用速率法检测。


美国取消了对ALT的筛查项目,许多国家和地区也取消了对ALT的筛查。中国属于肝炎高发国家,尤其在某些地区暂无开展核酸检测技术,对ALT的筛查是提高血液质量的一个保障,进而保证血液质量,保障临床充足的血液供应。


2、            丙型肝炎病毒技术方法学进展

  丙型病毒性肝炎,简称为丙型肝炎、丙肝,是一种由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染引起的病毒性肝炎,主要经输血、针刺、吸毒等传播。丙肝的传播途径与乙肝、艾滋病相同,但因公众对丙肝的了解度相对较低,且感染基本无症状,因而造成的危害相对更大。丙型肝炎呈现全球性流行,可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌。丙肝与乙肝不同,没有预防疫苗,控制传染源和阻断传播途径是最有效的方式。因此,早诊断早发现HCV感染者是预防丙型肝炎的重中之重。


由中华人民共和国卫生行业标准制定的《丙型病毒性肝炎筛查及管理Screening and management of viral hepatitis C》中提及丙型肝炎病毒检测方法学分血清学检测,应选择择ETA法或CIA法检测抗一HCV;HCV核酸检测,RT-PCR用于检测HCV RNA,阳性者提示病毒复制。其检测的临床意义如下:


7.25蓝皮书HCV检测结果表格.jpg

表1 HCV检测结果的解释

 

抗-HCV检测方法包括酶联免疫吸附试验、化学发光免疫法、重组免疫印迹法(RI-BA)、免疫层析法以及蛋白芯片检测法(用于抗-HCV的分型)等。


HCV-RNA检测包括定性和定量两种检测方法。临床检测主要是定量检测,疗效分析;血筛用于病原体的定性筛查。HCV RNA的定性检测主要用核酸扩增技术检测血中的RNA。如扩增技术有逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)或转录介导扩增术(TMA)。定性检测主要用于急慢性丙型肝炎的确诊。HCV RNA的定量检测主要有定量TR-PCR、分支链DNA信号放大技术(d DNA)、实时荧光定量PCR。定量检测主要用于检测HCV RNA的动态水平,对抗病毒治疗的选择与疗效检测有重要作用。


 HCV抗原检测,主要是对HCV核心抗原(HCV c AG)进行检测。美国Ortho公司使用的双抗体夹心法定性或定量检测血清中总的或游离的HCV c AG的ELISA试剂。2003年巴黎召开的有关HCV c AG检测技术的第一届专题会认为,该试剂对HCV c AG的检出比抗-HCV的检出约早49天,可用于血筛,进而提高了输血的安全性。引用 血液筛查中常用的丙型肝炎病毒检测方法 任静 韩卫 文章编号1004~2806(2011)06-0363-04


 日本是最早对血液进行HBV、HCV、HIV进行核酸检测的国家。英国、法国、德国、新加坡、中国香港也相继采用不同检测方式对血液进行核酸筛检。2013年,国家卫生和计划生育委员会制定并印发的《全面推进血站核酸检测工作实施方案(2013~2015)》。此方案的强力推动有助于进一步保障我国的用血安全。

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    【CAIVD蓝皮书】血源安全检测(二)

    第二节          血源安全检测项目及技术


    血站血液采集作为社会血液供给的最主要来源,对于血液安全健康具有不可推卸的责任,所以确保血源健康安全是血站采供血机构重要任务,血源安全检测是保证血源健康安全重要环节之一。


    一、        检测项目

    大力开展无偿献血,对献血者必须进行谷丙转氨酶(ALT)、HBsAg、抗HCV检测。核酸血液筛查可大大提高血液安全性,特别是提高对我国较为复杂的HBV 低滴度感染标本的检出能力。(内容源自:核酸血筛在献血者常规筛查中的应用研究*曾劲峰1 许晓绚1 李活1 叶贤林1 陈华2△ 曹玉峰2( 1. 深圳市血液中心,广东深圳518035; 2. 上海科华生物技术有限公司)


    依据2015板血站技术操作规程规定,血站采供血机构输血相关传染病的检测项目有:

    1. 人类免疫缺陷病毒(HIV)感染标志物包括①人类免疫缺陷病毒核酸;②人类免疫缺陷病毒1型抗体(抗HIV-1)和人类免疫缺陷病毒2型抗体(抗HIV-2),或者抗HIV-1、抗HIV-2和p24抗原(HIV Ag/Ab);

    2.乙型肝炎病毒(HBV)感染标志物包括:①乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA);②乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg);

    3.丙型肝炎病毒(HCV)感染标志物包括:①丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA);②丙型肝炎病毒抗体(抗HCV),或者HCV抗原和抗体(HCV Ag/Ab);

    4.梅毒螺旋体感染标志物:梅毒螺旋体特异性抗体(抗TP);

    5. 丙氨酸氨基转移酶(ALT);

    6.国家和省级卫生计生行政部门规定的地方性、时限性输血相关传染病标志物(如:HTLV等)。


    在血液制品行业,因血液和血液制品在急救治疗和防病中的重要作用,确保液和原料血浆的安全,最大限度地降低经血传播疾病的危险。涉及相关检测项目除了上述的常规项目外,还涉及HCV、HDV、HTLV、CMV、EBV、B19 (Humanparvovirus)等


    二、        检测方法及检测策略

    依据2015板血站技术操作规程规定,检测方法包括:

    1.核酸扩增检测技术包括转录介导的核酸扩增检测技术(TMA)、实时荧光聚合酶链反应(PCR);

    2.血清学检测技术,包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光免疫分析试验(CLIA);

    3. 速率法(湿化学法)。所以从事血源检测试剂生产的试剂厂家与血源安全检测息息相关。

    检测策略

    (1)实施核酸检测试剂批签发之前,HIV、HBV和HCV感染标志物应采用2遍血清学检测和1遍核酸检测,血清学检测应采用2个不同生产厂家的试剂;实施核酸检测试剂批签发之后,HIV、HBV和HCV感染标志物应采用核酸和血清学检测2种方法各进行1次检测。对于酶免检测阳性的标本可不再进行核酸检测,直接视为该项目检测结果不合格。

    (2)梅毒螺旋体感染标志物采用2个不同生产厂家的血清学检测试剂进

    行检测。

    (3) ALT采用速率法(湿化学法)进行1次检测。其中血源筛查中核酸扩增检测技术对于隐匿性乙肝、免疫沉默。缩短了乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒检测的窗口期。

    献血时,会遇到处于“窗口期”的献血者。“窗口期”是指部分献血者已经感染了HBV或HCV,在一段时间内抗HBV或抗HCV尚未产生。目前检测献血者常规检测不能检出。应用核酸技术进行检测科缩短“窗口期”,但并不能消除“窗口期”。筛选献血者的血清学检测方法不敏感。


    三、        核酸检测的优势

    控制输血相关传染病的传播已成为全社会关注的焦点,虽然现行的国家法定HBsAg 及HCV、HIV抗体的血清学ELISA 筛查检测大大降低了输血传染病毒风险,但由于我国是肝炎的高发区,HBsAg携带率为9. 09%,HBV 流行率高达60% 以上,抗-HCV 阳性也在3. 2%[1],艾滋病亦处于快速发展趋势,目前的ELISA 检测试剂灵敏度难以杜绝输血风险,报道的HCV RNA 阳性与LISA 阴性比率为0. 01% ~ 0. 19%,HBV DNA 阳性与ELISA 阴性比率0. 4% ~ 0. 92%,大大高于国外献血者检出率[2,3],输血血源质量存在极大隐患,主要原因在于病毒感染献血者的“窗口期”漏检现象。(内容源自:核酸血筛在献血者常规筛查中的应用研究*曾劲峰1 许晓绚1 李活1 叶贤林1 陈华2△ 曹玉峰2( 1. 深圳市血液中心,广东深圳518035; 2. 上海科华生物技术有限公司)

     

    近年来,随着以核酸扩增检测技术(NAT)为代表的分子生物学技术在血液筛查方面的应用, 输血及血液制品安全性有了很大的提高, 从理论上该技术能显著地缩短病原体检出的“窗口期”, NAT检测HBV、HCV、HIV病毒的窗口期较抗体检测分别提前9天、25天和14天[2]。这一技术将在我国的血液中心、血库和血液制品生产企业逐步得到广泛的应用和推广

     (兰州生物制品研究所, 兰州 730046) 核酸扩增检测技术用于血液和原料血浆筛查的进展 周海云, 杨庆梅综述;张云涛审校

     

    第三节         血源安全检测领域学术、技术和产品的国内外发展状况

     

    1、            谷丙转氨酶(ALT)检测技术方法学进展

    谷丙转氨酶(ALT)主要存在肝细胞中。ALT在健康人群中,血清含量很低,当肝脏发生病变损害时,肝细胞质内的ALT因肝细胞膜的通透性增强而释放到血液中,导致血液中的ALT含量升高。ALT的升高大致可分为病理和非病理因素。病理因素包括肝脏本身疾病;其他含有ALT的脏器组织如心、肾、脑等,如果出现病变,也可在血液中出现ALT异常;如果ALT排除的管道出现梗阻如胆管、胆囊和胰腺,均可使ALT升高。生理因素包括重度脂肪血、、感冒、饮酒、药物、剧烈运动、睡眠不足、体质量超标等引起的非特异性升高。另外也会因性别、年龄、职业、季节等有关。另外,血样的运输、保存、温度等多种条件也可引起ALT的升高,如夏季温度相对较高,采集后的血液容易导致离体的血细胞糖酵解代谢增强,进而引起酮体过多,造成ALT升高。


    谷丙转氨酶(ALT)检测的临床意义随着检测技术的发展也产生了一些变化。国内外许多文献介绍ALT异常与抗-HCV和HBV表面抗原的阳性有一定相关性,ALT的异常升高与输血引起的肝炎有平行关系。在对HBV和HCV特异性检测技术不成熟的情况下,ALT对预防HBV和HCV输血有一定的预防作用。对于HBV检测而言,随着酶联免疫吸附技术已趋于成熟;HBV-DNA核酸检测技术应用;对于HCV检测而言,随着第二三代抗-HCV的特异性酶联免疫吸附检测方法的提高,将窗口期缩短至6周;以及HCV-DNA核酸检测技术应用。在某种程度上,ALT血筛在核酸检测未开展地区仍然起到一定的避免漏检作用。


    谷丙转氨酶(ALT)检测技术方法学有四种即层析法、比色法、速率法(又称连续检测法或动力学法)、荧光法。比色法影响因素较多,敏感性和特异性较差,不需要特殊仪器检测,检测试剂相对便宜;速率法与比色法相比,检测结果相对准确,且需要生化分析仪,对试剂的要求也相对较高。自从中国1997年颁布的《输血技术操作规程》中新增速率法之后,目前国内多数血液机构都使用大型生化分析仪,采用速率法检测。


    美国取消了对ALT的筛查项目,许多国家和地区也取消了对ALT的筛查。中国属于肝炎高发国家,尤其在某些地区暂无开展核酸检测技术,对ALT的筛查是提高血液质量的一个保障,进而保证血液质量,保障临床充足的血液供应。


    2、            丙型肝炎病毒技术方法学进展

      丙型病毒性肝炎,简称为丙型肝炎、丙肝,是一种由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染引起的病毒性肝炎,主要经输血、针刺、吸毒等传播。丙肝的传播途径与乙肝、艾滋病相同,但因公众对丙肝的了解度相对较低,且感染基本无症状,因而造成的危害相对更大。丙型肝炎呈现全球性流行,可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌。丙肝与乙肝不同,没有预防疫苗,控制传染源和阻断传播途径是最有效的方式。因此,早诊断早发现HCV感染者是预防丙型肝炎的重中之重。


    由中华人民共和国卫生行业标准制定的《丙型病毒性肝炎筛查及管理Screening and management of viral hepatitis C》中提及丙型肝炎病毒检测方法学分血清学检测,应选择择ETA法或CIA法检测抗一HCV;HCV核酸检测,RT-PCR用于检测HCV RNA,阳性者提示病毒复制。其检测的临床意义如下:


    7.25蓝皮书HCV检测结果表格.jpg

    表1 HCV检测结果的解释

     

    抗-HCV检测方法包括酶联免疫吸附试验、化学发光免疫法、重组免疫印迹法(RI-BA)、免疫层析法以及蛋白芯片检测法(用于抗-HCV的分型)等。


    HCV-RNA检测包括定性和定量两种检测方法。临床检测主要是定量检测,疗效分析;血筛用于病原体的定性筛查。HCV RNA的定性检测主要用核酸扩增技术检测血中的RNA。如扩增技术有逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)或转录介导扩增术(TMA)。定性检测主要用于急慢性丙型肝炎的确诊。HCV RNA的定量检测主要有定量TR-PCR、分支链DNA信号放大技术(d DNA)、实时荧光定量PCR。定量检测主要用于检测HCV RNA的动态水平,对抗病毒治疗的选择与疗效检测有重要作用。


     HCV抗原检测,主要是对HCV核心抗原(HCV c AG)进行检测。美国Ortho公司使用的双抗体夹心法定性或定量检测血清中总的或游离的HCV c AG的ELISA试剂。2003年巴黎召开的有关HCV c AG检测技术的第一届专题会认为,该试剂对HCV c AG的检出比抗-HCV的检出约早49天,可用于血筛,进而提高了输血的安全性。引用 血液筛查中常用的丙型肝炎病毒检测方法 任静 韩卫 文章编号1004~2806(2011)06-0363-04


     日本是最早对血液进行HBV、HCV、HIV进行核酸检测的国家。英国、法国、德国、新加坡、中国香港也相继采用不同检测方式对血液进行核酸筛检。2013年,国家卫生和计划生育委员会制定并印发的《全面推进血站核酸检测工作实施方案(2013~2015)》。此方案的强力推动有助于进一步保障我国的用血安全。